抗體純化試劑盒說(shuō)明書

（單次純化100mg-500mg抗體） 

一、 原理

蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái)。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白。

二、適用范圍

動(dòng)物血清、腹水的濃縮、提純。

三、抗體純化特點(diǎn)

粗純純度＞90%；

精細(xì)純度＞98%

四、試劑盒組成（可單次純化100mg）

五、純化步驟

（一）粗純

①取待純化抗體6ml，加入6ml磷酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋,再加入12ml粗純純化液，搖勻1分鐘；

②立即8000prm/min離心5min，棄去上清，得到沉淀物；

③加入復(fù)溶液，復(fù)溶。
（二）精細(xì)純化

①親和柱用去離子水洗去20%乙醇，再用結(jié)合液清洗2遍；

②用結(jié)合液稀釋抗體濃度為1mg/ml，上樣，控制流速為20秒/滴；

③抗體流完后加入原抗體等體積結(jié)合液沖洗柱內(nèi)抗體；

④結(jié)合液流完后加入洗脫液，洗脫目的蛋白，取1.5ml離心管收集洗脫液得到抗體溶液；

⑤目的蛋白測(cè)蛋白濃度；

⑥用20%乙醇保存柱子，于4℃冰箱中保存，可反復(fù)使用10次以上。

七、 注意事項(xiàng)

①操作置于室溫進(jìn)行，所用溶液用前先回溫，上樣前均需要用0.2微米濾膜過(guò)濾。

②避免樣品反復(fù)凍融和劇烈攪動(dòng)，以防蛋白質(zhì)的變性。

④精純抗體上樣前需要用0.2微米濾膜過(guò)濾。

⑤蛋白濃度不要高于1mg/ml。

⑥親和柱在使用過(guò)程中，要求液體不能流干，基質(zhì)中不得有氣泡存在。

⑦上樣前，樣品需離心或用濾膜過(guò)濾，以防堵塞柱子。

⑧樣品過(guò)渡裂解會(huì)引起蛋白變性，降低結(jié)合載量，采用溫和的裂解方法，增加結(jié)合載量。需要控制上樣和洗脫時(shí)流速讓其有足夠的吸附和分離時(shí)間，以便達(dá)到最大的結(jié)合載量。

⑨蛋白的性質(zhì)、pH、溫度等也會(huì)影響蛋白的結(jié)合載量。

八、貯藏條件及保存期

    貯藏條件：-4℃

保 質(zhì) 期： 12個(gè)月